Реактив Ерліха.
1 г пара-диметиламінобензальдегіду розчиняють в 95 см3 96 ° -ного етилового спирту і додають 20 см3 соляної кислоти. Реактив зберігають без доступу світла.
Реактив Ковача.
5 г пара-диметиламінобензальдегіду розчиняють в 75 см3 амилового спирту при нагріванні на водяній бані при температурі 50-55 ° С, охолоджують і додають 25 см3 концентрованої соляної кислоти. Реактив має жовте забарвлення, зберігають його в холодильнику при температурі 4 ° С.
Для визначення індолу до 1 -2-добової бульонной культурі додають 1 - 1,5 см3 ефіру для екстрагування індолу, струшують, потім обережно по стінці вносять 7 - 10 крапель реактиву, при позитивній реакції на кордоні ефіру і бульйону з'являється яскраво-малинове забарвлення. Суть реакції полягає в тому, що індол (ортобензопіррол), що утворюється при розщепленні триптофану, вступає в хімічну реакцію з кислотно-спиртовим розчином пара-діметілбензальдегіда і дає рожеве або червоне забарвлення.
Варіант 1. 5г пара-диметиламінобензальдегіду, 10 см3 очищеної концентрованої ортофосфорної кислоти розчиняють в 50 см3 метилового спирту. У теплуватим розчині змочують фільтрувальний папір; висушують, нарізають вузькими смужками розміром 0,5 х 6 см. Колір паперу світло-жовтий, при наявності індолу змінюється від синювато-рожевого до інтенсивно малинового. Поява інших забарвлень на індикаторним папером не враховують.
Варіант 2. Фільтрувальний папір просочують насиченим (10% -ним водним) розчином щавлевої кислоти, висушують, розрізають на смужки. Колір паперу - білий зі слабким жовтуватим відтінком.
При наявності індолу нижня частина індикаторного папірця забарвлюється в рожевий колір (переглядати при світлі); при рясному освіту індолу спостерігається рожеве забарвлення всієї смужки.
Варіант 3. Фільтрувальний папір просочують реактивом Ковача; при наявності індолу з'являється рожевий і червоний колір.
Можна рекомендувати раціональний спосіб виготовлення "індольних" папірців. Для цього фільтрувальну папір розрізають на 5-6 аркушів розміром 25 х 15 см, згортають кожен уздовж навпіл і опускають перпендикулярно в реактив, налитий в кювету, змочивши папір на 3-4 см. Сушать папір при кімнатній температурі протягом 2-3 ч, розвісивши на білизняний мотузці. Потім зігнуту частину зрізають ножицями, а обидві вийшли смужки згортають в рулон, від яких перед вживанням відрізають необхідну кількість індикаторних папірців і закріплюють чистим кінцем під пробірку з посівом тест-культур.
Індикаторний папір для визначення сірководню.
У 100 см3 дистильованої води розчиняють 20 г ацетату свинцю і 1 г бікарбонату натрію і просочують смужки фільтрувального паперу. Після приготування папір залишається білою; при наявності сірководню нижня частина індикаторного папірця набуває чорно-бурий колір, іноді з металевим блиском. В даний час "сірководневі" папірці виготовляються промисловістю.
Здатність мікроорганізмів розщеплювати білки середовища до індолу і сірководню можна встановлювати в м'ясо-пептонном бульйоні, пептонній воді, але краще - в бульйоні Хоттингера.
0,4 г бромтимолового синього розчиняють в 40 см3 дистильованої води, нагріваючи до кипіння, потім додають 6,4 см3 0,1 н. розчину гідроксиду натрію, в результаті рідина стає зеленуватого кольору, і доводять дистильованою водою до 100 см3.
Індикатор може зберігатися довго в банку з темного скла, закритою притертою пробкою.
Бромтимоловий синій дозволяє визначити зміну реакції в межах pH 6,0-7,6. При pH 7,6 індикатор має синій колір, при 6,0 - жовтий. В межах pH від 6,0 до 7,6 забарвлення змінюється через різні відтінки зеленого кольору; в нейтральному середовищі (pH 7,0) індикатор має характерний трав'янистий відтінок.
Індикатор розоловой кислота.
1 г розоловой кислоти розчиняють в 500 см3 етилового спирту. Якщо розчин жовтого кольору, додають кілька крапель 0,1 н. розчину гідроксиду натрію до появи червонувато-оранжевого відтінку.
У кислому середовищі індикатор має лимонно-жовтий колір, в лужному - рожево-червоний; перехідна зона pH 6,8-7,0.
Індикатор Андреде.
0,5 г кислого фуксину розчиняють в 100 см3 дистильованої води і додають 15 - 18 см3 1 н. розчину гідроксиду натрію, перемішують і витримують при кімнатній температурі протягом 24 год, періодично струшуючи - колір індикатора змінюється від червоного до коричневого, при відсутності зміни забарвлення вносять до 1 см3 лугу і залишають на 24 ч.
У лабораторній практиці часто готують індикатор за іншою прописи: 0,5 т фуксину розчиняють в 16,4 см3 1 н. розчину гідроксиду натрію (4% -ний розчин). додають 100 см3 дистильованої води, відстоюють в термостаті при температурі 37 ° С протягом 24 год і потім протягом 48 год при кімнатній температурі на світлу.
Готовий індикатор має жовтий колір з коричневим відтінком, що нагадує колір чаю, В кислому середовищі набуває яскраво-малинову фарбу.
Приготований таким чином індикатор зберігають у флаконах з темного скла з притертою пробкою в звичайних умовах.
Індикатор для виявлення ферменту оксидази (цитохромоксидази) у аеробних мікроорганізмів.
За Ерліху.
30-40 мг альфа-нафола розчиняють в 2,5 см3 етилового спирту-ректифікату, додають, 5 см3 дистильованої води і розчиняють 40 60 мг пара-діметілоенілендіаміна.
Для визначення оксидази на поверхню 18-20-годинний Агарон культури наносять 1-2 краплі індикатора, при позитивній реакції через 1-3 хв з'являється яскраво-синє забарвлення в результаті утворення індофенолу синього.
З метою визначення цього ферменту у культур можна користуватися СІБ (стандарти індикаторні паперові), що випускаються Горьківський НДІ епідеміології та мікробіології (відповідно до повчання).
За Ковачу.
1 г пара-тетраметілфенілендіаміна розчиняють в 100 см3 дистильованої води.
Для визначення ферменту на поверхню добової агарної культури наносять кілька крапель реактиву, при позитивній реакції через 20-30 с культура забарвлюється в темно-червоний колір, обумовлений утворенням вурстеровского синього.
Тест-реактиви для виявлення редукционной активності бактерій.
Розчин А: при слабкому нагріванні розчиняють 0,8 г сульфоніловими кислоти в 100 см3 оцтової кислоти (5 н. Розчин).
Розчин Б: розчиняють 0,5 г альфа-нафтиламина і 0,6 г диметил-альфа-нафтиламина при підігріванні в 100 см3 оцтової кислоти (5 н. Розчин).
Реактиви токсичні. Їх зберігають у банках з темного скла з притертими пробками в холодильнику при температурі +4 ° С протягом 2 - 3 міс (при періодичному контролі).
Для визначення редукционной активності в живильне середовище, що містить нітрат калію, вносять одну петлю добової агарної культури і витримують в термостаті при температурі +37 ° С протягом 4 діб.
Здатність редукувати нітрати в нітрити визначають додаванням через 8 -10 год інкубування культури по 1 см3 розчинів А і Б; при позитивній реакції через кілька хвилин вміст пробірки набуває червоного кольору, при негативній - забарвлення середовища не змінюється, в цьому випадку спостереження проводять протягом 4 діб з метою виявлення сповільненій редукционной активності, Для підтвердження негативного результату в пробірку з культурою вносять невелику кількість цинкового пилу - під впливом іонів цинку нітрати відновлюються в нітрити і з'являється червоне забарвлення.
О.1 г метилового червоного розчиняють в 300 см3 96 ° -ного етилового спирту, потім додають 200 см3 дистильованої води.
Постановка реакції: до 2 см3 випробуваної культури, вирощеної на середовищі Кларка при температурі +37 або + 22 ° С протягом 2-5 діб, додають 5-6 крапель індикатора; при позитивній реакції середовище стає яскраво-червоною, так як ферментація глюкози супроводжується утворенням суміші кислот (молочної, оцтової, мурашиної та ін.), в результаті рН середовища зсувається в кислу сторону до 4,0-5,0. При негативній реакції середовище має жовтий колір. Індикатор призначений для проведення реакції на ферментацію глюкози.
Індикатор для реакції Фогес-Проскауера.
Тест-реактив складається з 2 окремих інгредієнтів: 6% -ного спиртового розчину альфа-нафтол (30 г альфа-нафтол розчиняють в 500 см3 96 ° -ного етилового спирту) і 40% -ного розчину гідроксиду калію (120 г КОН розчиняють в 300 см3 дистильованої води).
Постановка реакції: до 2,5 см3 2-5-добової культури, вирощеної на середовищі Кларка, додають в суворій послідовності 1 см3 розчину альфа-нафтол, потім 0,4 см3 40% -ної КОН; при позитивній реакції у верхній частині середовища з'являється червоне забарвлення. Суть реакції полягає в тому, що при розщепленні глюкози утворюється проміжний продукт ацетоін (ацетілметілкарбінол), який в присутності лугу і альфа-нафтол (каталізатора) окислюється до диацетила, що дає з пептоном середовища і КОН кольорову реакцію.
- Ви тут:
- Головна
- Вет.Сан.Експ.
- реактиви
