Для оцінки фізико-хімічних властивостей еритроцитів досліджують стійкість (резистентність) еритроцитів до різних впливів. Найбільшого поширення в клінічній практиці отримало дослідження осмотичної резистентності еритроцитів.
Уніфікований метод визначення осмотичної резистентності еритроцитів
в модифікації Л. І. Ідельсона (1974).
Кількісне визначення ступеня гемолізу еритроцитів в забуферних гіпотонічних розчинах хлориду натрію.
Основний розчин (по своїй осмотической концентрації відповідає 10% розчину хлориду натрію) має рН 7,4, склад розчину: двозаміщений фосфат натрію (Na2 HPО4) -27,31 г (або Na2 HPО4 * 2H2 O- 34,23, г), однозаміщений фосфат натрію (NaH2 PО4 * 2H2 О) -4,86 г, хлорид натрію-180 г, дистильована вода - до 2 л. Розчин можна зберігати в закритому посуді в холодильнику протягом кількох місяців.
Основний розчин розводять в 10 разів і отримують розчин, відповідний по своїй осмотической концентрації 1% розчину хлориду натрію. З цього розчину готують робочі розчини хлориду натрію наступних концентрацій: 0,85; 0,75; 0,70; 0,65; 0,60; 0,55; 0,50; 0,45; 0,40; 0,35; 0,30; 0,20; 0,10%. Можна приготувати по 100 мл цих робочих розчинів і зберігати їх в холодильнику. Придатні протягом 2 тижнів.
Спеціальне обладнання
- Фотоелектроколориметр.
- Термостат на 37 ° С.
хід визначення
Холоста проба - Надосадова рідина в пробірці, що містить 1% розчин хлориду натрію.
За 100% гемоліз приймають гемоліз в пробірці, що містить 0,1% розчин хлориду натрію. Обчислюють відсоток гемолізу в кожній пробірці, порівнюючи величини екстинкції надосадової рідини з екстинкція, прийнятої за 100%, за формулою:
Відсоток гемолізу = Ех * 100 / Е1, де
Е1 - екстинкція надосадової рідини в пробірці з 0,1% розчином хлориду натрію;
ЕХ - екстинкція досліджуваної проби;
100 - відсоток гемолізу в пробірці з 0,1% розчином хлориду натрію.
На наступний день повторюють дослідження з кров'ю, інкубувати 24 год при 37 ° С.
нормальні величини
У здорових в свіжої крові початок гемолізу відзначають при концентрації хлориду натрію 0,50-0,45%, а повний гемоліз - при 0,40-0,35% розчині хлориду натрію.
клінічне значення
Дослідження проводять при підозрі на гемолітичну анемію. Зниження осмотичної резистентності, т. Е. Поява гемолізу еритроцитів при більш високій, ніж в нормі, концентрації хлориду натрію (0,70-0,75%), спостерігається при спадковому мікросфероцітозе і деяких спадкових несфероцітарних гемолітичних анеміях, а також іноді при аутоімунноїгемолітичної анемії. У ряді випадків зниження осмотичної резистентності виявляється тільки при дослідженні инкубировались крові. Підвищення осмотичної резистентності характерно для таласемії, гемоглобинопатий.
Література.
Ідельсон Л. І. В кн.: Довідник з функціональної діагностики / Под ред. І. А. Кассірского.- М. Медицина, 1970, с. 401.