дослідження крові
Осмотична резистентність еритроцитів
Для оцінки фізико-хімічних властивостей еритроцитів досліджують їх резистентність до різних впливів. Найбільш часто в практиці визначають осмотичну резистентність еритроцитів. Розрізняють мінімальну і максимальну резистентність. Мінімальна резистентність еритроцитів визначається максимальною концентрацією гипотонического (менше 0,85%) розчину натрію хлориду (в серії поступово зменшуються концентрацій), при якій починається гемоліз найменш стійких еритроцитів, що знаходяться в розчині 3 ч. Максимальна резистентність еритроцитів визначається максимальною концентрацією гипотонического розчину натрію хлориду, що викликає протягом 3 ч гемоліз всіх еритроцитів.
Уніфікована методика визначення осмотичної резистентності еритроцитів в модифікації Л. І. Ідельсона
Принцип. Кількісне визначення ступеня гемолізу еритроцитів в забуферений гіпотонічних розчинах натрію хлориду.
Реактиви. основний розчин (по осмотической концентрації відповідає 10% розчину натрію хлориду), pH 7,4: натрію гідрофосфат безводний (Na2 HPO4) - 27,31 г або кристаллогидрат (Na2 HPO4 × 2Н2 0) - 34,23 г; натрію дигідрофосфат кристаллогидрат (NaH2 PO4 × 2Н2 O) - 4,86 г: натрію хлорид - 180 г; дистильована вода - до 2 л. Розчин можна зберігати в закритому посуді в холодильнику кілька місяців.
Основний розчин розводять в 10 разів дистильованою водою і отримують розчин, по осмотической концентрації відповідний 1% розчину натрію хлориду. З цього розчину готують робочі розчини, відповідні розчинів натрію хлориду наступних концентрацій: 0,85; 0,75; 0,70; 0,65; 0,60; 0,55; 0,50; 0,45; 0,40; 0,35; 0,30; 0,20; 0,10 %%. Доцільно приготувати по 100 мл цих робочих розчинів. Зберігають в холодильнику, придатні вони протягом 2 тижнів.
Спеціальне обладнання. 1) фотоелектроколориметр; 2) термостат на 37 ° С.
Контрольна проба - Надосадова рідина в пробірці, що містить робочий розчин з концентрацією натрію хлориду 1%.
Розрахунок. За повний (100%) гемоліз приймають гемоліз в пробірці з 0,1% розчином натрію хлориду. Обчислюють відсоток гемолізу в кожній пробірці, порівнюючи величину екстинкції надосадової рідини з екстинкція, прийнятої за 100%, за формулою:
де Е1 - екстинкція надосадової рідини в пробірці з 0,1% розчином натрію хлориду; Ех - екстинкція досліджуваної проби; 100 - повний гемоліз у пробірці з 0,1% розчином натрію хлориду.
На наступний день повторюють дослідження з кров'ю, інкубували протягом 24 год при 37 ° С.
Нормальні величини. У здорових людей у свіжій крові гемоліз (мінімальна резистентність еритроцитів) починається при концентрації натрію хлориду 0,50-0,45%, а повний гемоліз (максимальна резистентність еритроцитів) спостерігається в 0,40-0,35% розчині натрію хлориду.
Клінічне значення. Дане дослідження проводять при підозрі на гемолітичну анемію. Найменш стійкі до гіпотонічним розчинів сфероціти (поява гемолізу еритроцитів відзначено при більш високих концентраціях натрію хлориду 0,75-0,70%). Зниження осмотичної стійкості спостерігається не тільки при спадковому мікросфероцітозе, але і при деяких спадкових несфероцітарних гемолітичних анеміях, при аутоімунної гемолітичної анемії. Підвищення осмотичної резистентності еритроцитів характерно для таласемії, гемоглобінопатії, можливо при механічної жовтяниці.