ПО винаходів і відкриттів
19/00. опублік. 1973.
Патент СРСР N 334720, кл. З 12 N 9/52. опублік. 1970. (54) СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ Протеолітичні КОМПЛЕКСУ, призначених для застосування в зоотехнік
Винахід відноситься до біотехнології і призначене для застосування в зоотехніці, Мета винаходу †"підвищення загальної протеолітичної активності за рахунок переважання в комплексі протеаз типу І і забезпечення прискорення зростання тварин в процесі годування або в період вагітності.
Спосіб полягає в наступному.
Ферментація. використовують штам
Streptomyces fred (ac, типовий штам
WAKSMAN 3535, що зберігається в американському зборах типів культур ATCC під номером 10.745, Цей штам може бути періодично регенерирован класично И і> 1701 1 13 3АЗ (я) 5 З 12 N 9/52 // А 23 К 1/165 (С 12 і 9/52; З 12 R 1:54) (57) Винахід відноситься до біотехнології і призначене для застосування в зоотехніці. Мета винаходу †"підвищення загальної пратеолітіческой активності за рахунок переважання в комплексі протеаз типу ll u забезпечення прискорення зростання тварин в процесі годування або в період вагітності. Спосіб отримання протеолітичного комплексу полягає в культивуванні штаму Streptomyces
Готують предкультуру цього штаму спочатку в колбах з перемішуванням, потім в проміжному ферментере, потім здійснюють щеплення в ферментере промислового виробництва, які продукують середовище може мати наступний склад, г / л; соєве борошно 15, глюкоза 30. дікалійфосфат
1; карбонат кальцію 10. Після стерилізації її рН близько до 7,0, температуру ферментації підтримують при 28 С і аерацію†"
55 при 0,3 об'єму стерильного повітря на 1 об'єм середовища в 1 хв.
Значення рН середовища, спочатку близьке до 7,0, починає знижуватися і через близько 10 год часу ферментації досягає
6,5, потім воно швидко підвищується і через приблизно 20 год часу ферментації досягає 7,5, потім продовжує більш повільно підвищуватися до досягнення остаточно значення 8,2.
Важливо підтримувати рН рівним 75†"
7,0 шляхом автоматичного додавання кислотного розчину (3 н.соляной кислоти), що дозволяє уникнути фрагментації міцелію і виділення в середу деяких вторинних метаболітів, протеаз типу, l, 1Ь і пептідаз (ці вторинні метаболіти і ці ферменти також залишаються внутрішньоклітинними), збільшувати продукування протеаз типу 11, ill, І, Каторі є в основному позаклітинні ферменти, значно збільшити продукування протеази типу 11
Тривалість ферментації може змінюватися від 72 до 96 годин і кінцевий титр середовища може скласти близько 15000
0.А. / мл, що набагато перевищує відомий титр (3000 U.À. / мл), Одиниця Апзоп1сокращенно U.À, одночасно) відбувся визначається як кількість ферменту, яке, інкубували протягом 10 хв при 25 С і при рН 7, 5 в присутності денатурованого гемаглобіна, виділяє з цього субстрату еквівалент 1 ug тіроеіна, on рідшав яемий спектрофотометрической абсорбцією при 280 нм на фільтраті, не осідають тріхлоуксусной кислотою, Екстракція, Міцелій відокремлюють від продукує середовища шляхом осветляющей фільтрації, Комплекс замість того, щоб його екстрагувати класичними мет одами виділення ферментів (послідовне осадження. пропускання через колонку), екстрагують методом ультрафільтрації.
Мембрани для ультрафільтрації, які мають поріг поділу, відповідний молекулярної масі 30000, непридатні, оскільки вони можуть пропускати більше 50% комплексу, мембрани, які мають поріг поділу, відповідний молекулярної масі
Отриманий шляхом ультрафільтрації концентрат потім піддають розпорошення.
Отримують комплекс протеолітичних ферментів в формі порошку світло-бежевого кольору, який має титр принаймні
Загальний вихід у вигляді протеолітичної активності, який складає близько 70%, вище такого, який буде виходити в промисловості послідовними осадження або пропускання через колонки, Характеристика нового комплексу: наявність (певне ферментоелектрофорезом) протеаз типу II, ill, IV npu виключення протеае типу 4, Ib і пептідаз; †"переважання протеази типу 11, яка означає принаймні 40% загальної протеолітичної активності, причому протеази типу ill або IV позначають кожна щонайбільше 30% цієї загальної активності.
Характеристики основних протеаз комплексу, Протеаза типу 11. Молекулярна маса близька до 18000; ізоелектричної точка близька з 9,0; шляхом електрофорезу при рН
8,0 переміщення до катода з відносно слабкою швидкістю.
Протеаза типу Ill. Молекулярна маса близька до 14,000; ізоелектричної точка близька до 9; шляхом електрофорезу при рН 8 0 переміщення до катода з середньою швидкістю.
Протеаза типу 1 /, Молекулярна маса близька до 16500; ізоелектричної точка близька до 9,0; шляхом електрофорезу при рН
8,0 переміщення до катода з відносно великою швидкістю, fl р і м е р. Культивують штам S.
fradiae АТСС 10745, здійснюючи першу інокулюють в ферменторе загальним обсягом
2 м, корисний об'єм якого 1 мз. Повз учений інокулят використовують для культивування в промисловому ферменторе ємністю ЗО м і корисною ємністю 20 м, з
Ферментаційних середу має наступний склад для ємності 20 м, кг:
Соєве борошно 300
Карбонат кальцію 200
Перед ферментацією середу стерилізують, її рН доводять до 7,0, температуру ферментації встановлюють на 28 1 С, Середу в процесі ферментації аерують шляхом циркуляції 0,3 обсягу стерильного повітря на 1 об'єм середовища в 1 хв. Ферментацію здійснюють протягом близько 72 годин при підтримці рН 7,0-7,5 шляхом систематичного додавання 3 н, соляної кислоти.
Після 72 год концентрація протеолітичного комплексу в середовищі становить 15000
Екстракція. Культуральне середовище фільтрують через кларгель на класичному прес-фільтрі з фільтруюшей поверхнею 10 м.
Отриманий порошок бежевого кольору з'єднують з крохмалем для промислового використання.
Що використовується ультрафільтраційну пристрій є найбільш крупним торговим апаратом марки UFP 10, що випускається фірмою Рон-Пуленк.
Подача на ультрафільтри пристрій здійснюється за допомогою нагнітає насоса і регулюється відкриттям вихідного клапана. який оебспечівает заданий тиск, причому оптимум подачі складає 1000 л / м ч.
Застосування в зоотехніці пропонованого комплексу призводить до наилуч ним результатами, коли вони здійснюються згідно з такими умовами.
40 краще класифікуються, оскільки вони більш м'язисті і менш жирові, але ці поліпшення були нерегулярними.
Використання кормів, призначених для ссавців в період вагітності, годування і відібрання від грудей, Пропонований комплекс стимулює екзокринну активність підшлункової залози.
Це стимулювання підтверджується, зокрема, експериментами з пацюком і виражається в значному збільшенні внутріпанкреатіческая концентрації всіх ферментів, які виділяються панкреатическим каналом. Це збільшення може досягати 50% для амілази, 70% для тріп1701113 слногена і хімотріпслногена, 80% для ліпази.
Наличи ефекту стимуляції екзокріннсі активності поджелудочноі залози
3 «радий! Вважає, що комплекс буде.г Особливо еф калудсчнОЙ залози (у самок в кінці вагітності) лли коли потрібно интенс« «фіцірсвать 88 діяльність при
Відтворенні (у самок, які годують груддю численне г! Отомство) або при ацаптаціі (у молодих млекопітающлх в період
«) Т« «ят«! Я їх QT грудей). Сліду! Про «д! Іа прімсри
М.А.Т. = 17 р. Дсбааланйе f