- На пластині для визначення групи крові зліва направо підписують групи сироваток 0 # 945;ß (I), Аß (II), В # 945; (III) і в кутку ПІБ пацієнта.
- У два ряди по три великі краплі відповідно підписам на платівку зліва направо наносяться стандартні сироватки 0 # 945;ß (I), Аß (II), В # 945; (III) (0,1 мл). Кожна сироватка наноситься окремою піпеткою (частіше використовують очні піпетки).
- Поряд з кожною краплею сироватки паличкою (або окремої піпеткою) наносять досліджувану кров по одній маленькій краплі (0,01 мл).
- Cоотношеніе "сироватка. Кров" повинна бить10: 1.
(Орієнтовно крапля стандартної сироватки повинна бути рівна копійчаної монети, крапелька крові = голівці портняжной шпильки)
- Краплі ретельно перемішують паличками (кожну краплю - окремої паличкою, кутом предметного скла). Спостереження за ходом реакції проводять при легкому погойдуванні пластинки.
- Після закінчення 3-х хвилин (але не раніше) в ті краплі, де настала аглютинація еритроцитів, для виключення помилкової аглютинації додають по одній краплі (0,05 мл) ізотонічного розчину хлориду натрію і продовжують спостереження при погойдуванні пластин. Після внесення фізіологічного розчину помилкова аглютинація зникає, справжня - залишається без зміни або посилюється.
- Загальний час спостереження реакції - 5 хвилин.
Дані оцінки результатів реакції зі стандартними ізогемагглютінірующіх сироватками:
Наявність (відсутність) аглютинації
Негативним результат вважається в тому випадку, якщо крапля залишається гомогенно забарвленої і не містить зерняток і грудочок.
При визначенні групи крові з 3 парами стандартних сироваток можливі 4 варіанти результатів:
1) ознак аглютинації не дає жодна з трьох пар стандартних сироваток - досліджувана кров належить до 0 (I) групи;
2) аглютинації немає з сироваткою A (II) групи. У сироватках 0 (I) і B (III) груп виявлена аглютинація - досліджувана кров A (II) групи;
3) аглютинації немає з сироваткою B (III) групи. У сироватках 0 (I) і A (II) груп - аглютинація. Кров - B (III) групи;
4) всі сироватки викликали агглютинацию еритроцитів.
В останньому випадку для виключення неспецифічної агглютінабельності еритроцитів необхідно провести додаткове дослідження зі стандартною сироваткою AB (IV) групи. Лише за відсутності аглютинації при дослідженні з сироваткою IV групи дозволяє віднести досліджувану кров до групи AB (IV).
2. Визначення груп крові з моноклональними антитілами (Цоліклони анти-А і анти-В, анти-АВ).
Визначення груп крові з моноклональними антитілами (Цоліклони анти-А і анти-В, анти- АВ) здійснюватися звичайними методами виявлення антигенів еритроцитів: при масовому визначенні в установах служб крові-на планшетах або автоматичних системах, при індивідуальному -на білій порцеляновій або іншій пластині із змочуваною поверхнею.
Стандартні реагенти - Цоліклони анти-А і анти-В, анти -АВ отримані методом ліофільної сушки. Вони не є продуктами клітин людини і тому виключена контамінація препаратів вірусами гепатиту та СНІДу (синдрому набутого іммунодіфіціта).
Цоліклони анти-А (рожевого кольору) і анти-В (синього кольору) випускаються у флаконах або ампулах по 20, 50, 100 і 200 доз.
Для кожного визначення групи крові досить застосовувати по одній серії Цоліклони анти-А і анти-В (з причини високої активності реагентів).
Визначення груп крові виконує лікар. Медсестра готує оснащення для виконання тестів:
- штатив для пробірок з кров'ю донорів (реципієнтів)
- штатив для Цоліклони
- пісочний годинник на 5 хвилин
- журнал для реєстрації результатів
- ємності для дезінфекції використаних предметів.
-На планшет або фарфорову пластинку Цоліклони анти-А і анти-В наносять по одній великій краплі (0,1 мл) під відповідні написи: анти-А, анти-В.
- Поруч з краплями антитіл наносять досліджувану кров по одній маленькій краплі, приблизно в 10 разів менше краплі антитіл (0,01мл).
-При визначенні групи крові на планшеті антитіла і кров змішують ретельно вимитим сухим кулькою, похитуючи планшет.
При визначенні на фарфоровій пластинці кров і антитіла змішують скляною паличкою, яку попередньо промивають і насухо витирають.
Спостереження за ходом реакції з Цоліклони проводять при легкому погойдуванні пластинки або планшета протягом не більше 5 хв.
- Результат реакції в кожній краплі може бути позитивним або негативним.
Позитивний результат виражається в аглютинації еритроцитів.
При негативній реакції крапля залишається рівномірно забарвленою в червоний колір - агглютіногени в ній не виявлено.
Аглютинація Цоліклони анти-А і анти-В зазвичай настає в перші 3-5 сек.
Спостереження слід вести 2-5 хв на увазі можливості більш пізнього настання аглютинації з еритроцитами, що містять слабкі різновиди антигенів А і В.