Тема. Лабораторна діагностика натуральної віспи.
Лабораторна діагностика грипу, парагрипу, аденовірусних інфекцій.
Мета: На основі знань біології вірусу натуральної віспи (ЗНО), особливостей його взаємодії з макроорганизмом вміти обгрунтувати тактику лабораторної діагностики, специфічну профілактику викликається ним захворювання.
Класифікацію, морфобіологічні характеристику вірусу натуральної віспи.
Особливості епідеміології, патогенезу та імунітету при натуральної віспи.
Лабораторну діагностику натуральної віспи: матеріал, методи.
Специфічну профілактику натуральної віспи.
Розкривати заражений курячий ембріон, проводити індикацію вірусу натуральної віспи.
Особливості вірусу натуральної віспи, що визначають приналежність викликається ним захворювання до групи особливо небезпечних, карантинних інфекцій.
Класифікація вірусу натуральної віспи. Структура віріона і його антигенна характеристика.
Культивування вірусу натуральної віспи і методи індикації.
Особливості епідеміології, патогенезу та імунітету при натуральної віспи.
Матеріал і методи лабораторної діагностики натуральної віспи.
Специфічна профілактика натуральної віспи. Глобальна ліквідація натуральної віспи. Внесок СРСР в програму ВООЗ ліквідації натуральної віспи.
Вірус основакціни: його походження, використання в генній інженерії.
Завдання, що виконуються в ході заняття (УИРС):
Провести вірусологічне дослідження з метою діагностики натуральної віспи, для чого: розкрити курячий ембріон, заражений матеріалом від обстежуваного з діагнозом «натуральна віспа»; провести індикацію вірусу (макроскопічно, мікроскопічно при імпрегнації сріблом). Зробити висновок.
Методичні вказівки, що виконуються в ході УИРС:
Проведіть вірусологічне дослідження з метою діагностики натуральної віспи, для чого (початок дослідження см заняття №30)
Розкрийте курячий ембріон, зараженим матеріалом від обстежуваного з діагнозом «натуральна віспа»; проведіть індикацію вірусу (макроскопічно, мікроскопічно при імпрегнації сріблом). Перед розкриттям шкаралупу над повітряною камерою обробіть дезинфектантом (70% спирт), стерильними ножицями зріжте її на 2-3 мм вище кордону повітряної камери. Пінцетом знімете білкову оболонку і подрежьте ножицями хоріон-аллантоісную оболонку (ХАО) на кордоні з повітряною камерою. Вміст ембріона акуратно вилийте в стерильну чашку Петрі, а ХАО витягніть пінцетом в стерильний чашку Петрі і з фіз. розчином, розправте і вивчіть макроскопически.
Якщо в досліджуваному матеріалі (вміст везикул) був вірус натуральної віспи, то на ХАО через 72 год інкубування ембріонів виявляються дрібні, діаметром близько 1 мм, білі, щільні, різко обмежені бляшки.
При відсутності слідів ураження результати дослідження вважаються негативними.
Для мікроскопічного дослідження вмісту бляшок приготуйте препарат. Для цього ножицями виріжте шматочок ХАО, помістіть на предметне скло і розітріть за допомогою другого предметного скла. Препарати висушіть на повітрі і пофарбуйте по Морозову.
Техніка забарвлення по Морозову.
Налити реактив №1 (фіксатор - рідина Руге) на 1-3 хвилини, ретельно промити водою.
Налити реактив №2 (розчин таніну), нагріти до відходження парів, дати охолонути, ретельно промити водою.
Налити реактив №3 (розчин нітрату срібла), нагріти до відходження парів, дати охолонути, ретельно промити водою.
Висушити і микроскопировать і иммерсионной системою. У разі позитивного результату в препараті виявляють тільця Пашена.
На підставі отриманих результатів зробіть висновок, заповніть бланк-направлення та бланк - відповідь з вірусологічної лабораторії.
Для серологічної ідентифікації отриманої культури вірусу використовують центрифугат суспензії ХАО і діагностичну сироватку. Ідентифікацію проводять в реакції нейтралізації (РН), реакція гальмування гемаглютинації (РГГА, РПГА.
Питання для самоконтролю:
Назвіть властивість вірусу натуральної віспи (ЗНО), що дозволяють виявити його в світловому мікроскопі.
Обгрунтуйте можливість використання вірусоскопіческой діагностики при натуральної віспи.
Назвіть способи індикації ЗНО при його культивуванні в курячому ембріоні і культуру клітин тканини; які властивості вірусу лежать в їх основі.
Ким і коли був запропонований метод специфічної профілактики натуральної віспи?
Назвіть властивості вірусу віспи корів, що дозволили використовувати його для специфічної профілактики натуральної віспи у людей.
Назвіть стратегію і тактику програми ВООЗ глобальної ліквідації натуральної віспи. Ким і коли вперше вона була запропонована.
В якому році був зареєстрований в світі останній випадок захворювання натуральної віспи і з якого року в Росії не проводиться планова вакцинація?
Де зберігаються в даний час штами ЗНО?
В чому полягає суть отримання генно-інженерних вакцин на основі вірусу осповакціни?