Мета: На основі знань властивостей збудників бактеріальних кишкових інфекцій, їх морфофизиологических, біохімічних і серологічних властивостей, епідеміології і особливостей патогенезу викликаються ними захворювань вміти обгрунтувати тактику мікробіологічної діагностики та профілактику викликаються ними захворювань.
1. Особливості збудників бактеріальних кишкових інфекцій, що визначають їх роль в інфекційній патології людини.
2. Морфофизиологические і біохімічні властивості, особливості епідеміології, патогенезу та імунітету, що викликаються ними захворювань.
3. Матеріал і методи мікробіологічної діагностики бактеріальних кишкових інфекцій.
4. Неспецифічну профілактику бактеріальних кишкових інфекцій.
1. Відібрати на середовищах первинного посіву характерні для бактеріальних кишкових інфекцій колонії.
2. Вивчити морфо-тинкторіальних властивості і перевірити чистоту виділених культур.
3. Врахувати і оцінити результати вивчення біохімічних (середа Ресселя, «строкатий ряд») і антигенних властивостей культур з метою їх ідентифікації.
4. Врахувати і оцінити результати РА з метою серологічної ідентифікації культури.
5. Заповнити бланки-напрямки і бланки-відповіді з бак. лабораторії.
1. Класифікація і морфофизиологические властивості збудників бактеріальних кишкових інфекцій.
2. Фактори вірулентності збудників бактеріальних кишкових інфекцій.
3. Особливості епідеміології та патогенезу захворювань, що викликаються збудниками бактеріальних кишкових інфекцій.
4. Матеріали і методи мікробіологічної діагностики.
5. Оцінка чутливості виділених штамів до антибіотиків.
Завдання, що виконуються в ході заняття:
Завдання 1. Провести мікроскопію Грам негативних бактеріальних культур. Забарвлення за Грамом.
Escherichia coli Shigella sonnei Salmonella enterica
Завдання 2. Завдання. Бактеріологічна діагностика коліентеритів.
В бактеріологічну лабораторію поступив матеріал (випорожнення) від хворого з підозрою на гострий коліт. В анамнезі: часті випорожнення з домішками слизу і, часто, тенезмами, болями в животі. Були проведені наступні лабораторні тести:
1). Посів досліджуваного матеріалу на середовище Ендо (поживна основа, сульфіт натрію і фуксин основний - пригнічують ріст грампозитивних мікроорганізмів, a-D-лактоза):
Оцініть результат. Опишіть, виявлені колонії:
Поясніть причину забарвлення колоній на середовищі Ендо:
2). Провели тест на каталазу
3). Визначали біохімічні властивості виділеної культури:
Завдання 4. Завдання. Бактеріологічна діагностика черевного тифу і паратифів.
В бактеріологічну лабораторію поступив матеріал від хворого з підозрою на дизентерію. В анамнезі: підвищення температури до 38-39 ° С, виражена слабкість, анорексія, головний біль, діарея. Мова потовщений, обкладений сіро-коричневим нальотом, з відбитками зубів по краях. Збільшені печінка і селезінка. На шкірі верхніх відділів живота і нижніх відділів грудної клітини виявлено висип, число її елементів 5-6, за характером розеольозний.
1). Вкажіть який матеріал можна взяти на дослідження:
2). Оцініть результат посіву на Середу Ендо, середу з глюкозою і середу Вільсона-Блера:
Аглютиніни до збудників черевного тифу і паратифів виявляють в сироватці крові, починаючи з 8-10 дня захворювання і пізніше. Динаміка їх накопичення вельми своєрідна: спочатку з'являються антитіла до О-антигену, але їх титр швидко зменшується після одужання. Н-і Vi-антитіла з'являються пізніше, але з роками зберігаються в високих титрах після хвороби, щеплень і у бактеріоносіїв. У зв'язку з цим для правильної оцінки серологічної реакції важливо одночасно виявляти всі типи аглютинінів. Для постановки реакції аглютинації Відаля необхідно три компонента: 1) антитіла (сироватка хворого), 2) антиген (бактеріальний або еритроцитарний діагностикум), 3) 0,85% розчин хлориду натрію (електроліт). Для отримання сироватки у хворого з вени, пальця або мочки вуха в стерильну пробірку беруть 2-3 мл крові, ставлять її в термостат на 30 хв для згортання. Згусток, що утворився обводять пастерівською піпеткою, відокремлюючи його від стінок пробірки, поміщають на 30-40 хв в холодильник, відсмоктують сироватку і роблять її робоче розведення 1:50. Потім в шести паралельних рядах пробірок роблять такі розведення сироватки від 1: 100 до 1: 1600 по стандартною схемою. Як антигени для реакції аглютинації використовують черевнотифозні монодіагностікуми О9 і Hd, а також паратіфозние О-і Н-діагностикуми. Вони є 3-х млрд суспензії зазначених бактерій, убитих нагріванням або формаліном. О-діагностикуми готують кип'ятінням культур або обробляють їх спиртом, Н-діагностикуми - обробкою культур формаліном. Остаточний облік проводять через 18-20 год знаходження пробірок при кімнатній температурі. При позитивній реакції аглютинації утворюється білуватий осад на дні пробірки з більш-менш прозорою рідиною над ним. При негативній реакції рідина залишається каламутною, осад на дні пробірки відсутній. Аглютинацію вважають специфічною, коли в контрольних пробірках (КС і КД) аглютінат не утворюється. При типовій клінічній картині черевного тифу діагностичним титром реакції Відаля у хворих, які не прищеплювалися, вважають розведення 1: 100 і вище, при атипових або стертих формах захворювання - не нижче 1: 200. Останнім часом реакції Відаля не вважають дуже специфічною. Вона може бути позитивною і при інших захворюваннях, що супроводжуються лихоманкою, після щеплення або раніше перенесеної хвороби і т.п. І все ж висока специфічність реакції може бути виявлена при її постановці в динаміці методом парних сироваток. Ні анамнестические, ні прищепні або групові антитіла не покажуть наростання титру з другої сироваткою, взятою через 10-12 днів.
5) .Тісто на фаготіпірованіе за методом Фішера
Випробувану добову бульонную культуру засівають на МПА, потім умовно ділять чашку на квадрати. У кожен квадрат наносять по одній краплі різних фагів. Після добової інкубації в термостаті відзначають квадрати, в яких наголошується лізис бактерій. Фаготип бактеріальної культури визначається типом лізуючого її фага. У квадрат №8 внесений фаг до Salmonella enterica subsp.Typhi
Який тест потрібно провести, щоб призначить лікування пацієнта? ___________________________
6). Через місяць після перенесеного захворювання у пацієнта взяли кров для виявлення Vi-антигену. (Поряд з іншими антигенами збудник черевного тифу містить Vi-антиген, який забезпечує стійкість збудника до фагоцитозу (здатності спеціалізованих клітин організму, фагоцитів, поглинати і перетравлювати чужорідні частинки, в тому числі і мікроорганізми), сприяє хронізації інфекції і черевнотифозні бактеріоносійства.)
Реакція непрямої гемаглютинації (РНГА).
Зробіть висновок про стан пацієнта з огляду на, що виявлення антитіл до Vi-антигену Salmonella enterica subsp.Typhi в титрі 1: 40-1: 80 і вище дає підставу підозрювати хронічне носійство черевнотифозних бактерій або розвиток імунної реакції на вакцинацію проти черевного тифу. Відсутність підвищення або низький титр антитіл свідчать про те, що збудника черевного тифу немає, або про низьку ефективність вакцинації.
- Полівакцина TabTe - хімічна вакцина. Являє собою препарат, що містить в прищеплювальної дозі дорослих (1,5 мл) повних антигенів черевнотифозними 0,1 мг і паратіфозних А і В 0,25 мг, а також 10 ЄС правцевого анатоксину. Всі антигени і правцевий анатоксин адсорбовані на гідроокису алюмінію. Після імунізації полівакціной через 30-40 днів обов'язково проводиться додаткова ін'єкція правцевого анатоксину в дозі 0,5 мл.
Вакцина брюшнотифозная полисахаридная рідка
Виробник: Росія Склад: розчин капсульного полісахариду, витягнутого з супернатанта культури Salmonella typhi. очищеного ферментативними і фізико-хімічними методами; консервант - фенол.
Приклад ідентифікації невідомого мікроорганізму класичними мікробіологічними методами:
Питання для самоконтролю:
1. Обгрунтуйте вибір середовищ для первинного посіву випорожнень з метою діагностики бактеріальної дизентерії.
2. Назвіть види шигел, що мають найбільше епідеміологічне значення на сучасному етапі.
3. Чому бактеріальну дизентерію називають хворобою «брудних рук»? Обгрунтуйте.
4. Обгрунтуйте вибір методів мікробіологічної діагностики гострої і хронічної бактеріальної дизентерії.
5. Назвіть час видачі позитивної відповіді з бак. лабораторії при підозрі на бактеріальну дизентерію.
6. Які властивості лежать в основі диференціації та ідентифікації шигел.
7. Заходи неспецифічної профілактики бактеріальної дизентерії.
Лекції по мікробіології.