Виділення - чиста культура
Бактеріологічне дослідження засноване на культивуванні бактерій на живильних середовищах, виділення чистої культури збудника і її ідентифікації. Чистої культурою називають популяцію мікроорганізмів одного виду, як правило вирощену з ізольованою колонії на щільному живильному середовищі. Роздільна здатність методу складає в середньому 1000 клітин в 1 мл. [31]
Виявлення холерного вібріона в воді здійснюється в основному методом збагачення з обов'язковим виділенням чистих культур збудника і їх ідеї-тіфінвціей. [32]
Існує ряд своєрідних в фізіологічному відношенні мікробів, які вимагають індивідуальних методів для виділення чистих культур. До них відносяться нитрифицирующие бактерії, железобактерии, збудники метанового бродіння та ін. Для отримання культур цих мікробів користуються методикою елективних або виборчих середовищ. [33]
Метод ПЛР дозволяє ідентифікувати невідомі мікроорганізми, що знаходяться в природному пробі, без виділення чистих культур. [34]
Головною умовою для проведення точних експериментів з фізіології, біохімії, цитології і генетики мікроорганізмів є виділення чистих культур. Отримати чисту культуру анаеробів дуже складно. Останнім часом були створені спеціальні прилади - анаеростатах, в яких мікроорганізми можна культивувати на щільних поживних середовищах в атмосфері, майже повністю позбавленої кисню. Але і при використанні сучасних приладів і засобів виділення і инкубирование чистих культур з високим ступенем анаеробних є вкрай важкою справою. Тому, ймовірно, переважна більшість, наприклад, сульфатредуцирующих, цілий-люлозолітіческіх і інших спороносних анаеробів залишаються досі невідомими. По суті, з цих фізіологічних груп, широко поширених в природі, в лабораторіях отримані лише одиничні культури. [35]
Зараження експериментальних тварин (миші, щури, хом'яки, кролики, морські свинки, собаки, кішки) проводять для виділення чистої культури гриба. вивчення патогенних властивостей збудника, випробування нових лікарських препаратів. Матеріал вводять тваринам різними методами: накожно, під шкіру, підшкірно, внутрішньом'язово, внут-рібрюшінно, внутрішньовенно, внутрисердечно, интрацеребрально, в кіготь, перорально, интратрахеально. Результати враховують за характером виділеної культури, даними розтину, гістологічного дослідження на наявність гриба і реакції макроорганізму. [36]
Розтин загиблих, а іноді і хворих тварин проводиться для вилучення уражених органів, виявлення збудника, що викликав загибель тварини, виділення чистої культури збудника і визначення місця його локалізації. Хворих тварин забивають за допомогою ефірного наркозу або повітряної емболії. [37]
На 2 - й день дослідження матеріал з середи накопичення пересівають на чашки з щільними середовищами (Плоскірєва, Ендо, Мак-Конки) для виділення чистої культури. На диференційно-діагностичних середовищах через 18 - 24 год інкубації виявляють безбарвні колонії, так як сальмонели не ферментує лактозу (див. Кол. Після врахування характеру росту на чашках роблять пересів на комбіновану поліуглеводную середу. [38]
Механізму утворення метану присвячено багато робіт, але виділити чисті культури бактерій, що викликають дані процеси, вдалося вперше Баркеру в 1936 р Він розробив техніку виділення чистих культур метанових бактерій. засновану на біологічних і біохімічних особливостях цих видів. [39]
Підозрілі колонії (незалежно від результату РА або иммунофлюоресцентного дослідження) пересівають на сектор лужного ПА і на поліуглеводную середу (Рассела, Кліглера або ін.) Для виділення чистої культури та її ідентифікації. [40]
Працюючи з експериментальними тваринами, необхідно пам'ятати про існування у них спонтанних бактеріальних і вірусних захворювань, а також латентних інфекцій, що активізуються в результаті додаткового штучного зараження, що ускладнює виділення чистої культури збудника і встановлення його етіологічної ролі. Цього недоліку позбавлені гнотобіоти (тварини без аутомікрофлори) і вільні від патогенної мікрофлори (СПФ) тварини. [41]
Виділення чистої культури проводиться шляхом масового висіву на косою агар Ешбі з окремих колоній і подальшого контролю і відбраковування, як це було зазначено вище. [42]
Пліснява вирощують в чистих культурах, тому що тільки таким чином можна правильно вивчити їх розвиток і довго зберігати. Для виділення чистої культури з суміші мікроорганізмів, отриманої простим ізолюванням їх з природних умов, слід дотримуватися певних методів. Щоб виділити чисті культури використовують два методи: розсівання і одноклітинних культур. [43]
Для виділення чистої культури використовують гемолімфу хворих комах. Попередньо поверхневі частини личинок стерилізують 0 5% - ним розчином хлорного натрію (3 рази по 15 хвилин), струшуючи їх в колбі, з наступним промиванням у дистильованій воді. Потім фільтрувальної папером з личинки видаляють воду, що залишилася і проколюють її голкою. Випливає гемолімфу збирають стерильним тампоном і наносять на поверхню агару. При роботі зі спорами бактерії краплю гемолімфи наносять на предметне скло, дають їй розтектися по склу та після висихання, до посіву спор на середу, пастеризують інокулюм при 75 ° С протягом 15 хвилин. [45]
Сторінки: 1 2 3 4