ДНК потрапляє в ядро. Однак вірусні вектори мають ряд недоліків вони дорогі і часто мають обмежену клонуючої ємністю, що не дозволяє регулювати експресію терапевтичного гена за допомогою тканеспеціфічних послідовностей. Крім того, вірусні білки можуть викликати запальну реакцію. що виключає повторне введення вектора. Тому були розроблені невірусні системи доставки генів. [C.499]
Ретровірусний вектор може включити лише близько 10000 вт. Маючи в руках готовий вірусний вектор. їм можна інфікувати відповідні клітини-мішені. наприклад, фібробласти, які експресують відповідні поверхневі рецептори. [C.585]
Вірусні вектори не набули широкого поширення. Характерною рисою еукаріотичних вірусів є компактне будова їх генома і практично повна відсутність генів. несуттєвих для їх розвитку. По тому клонування з їх допомогою чужорідної ДНК викликає їх дефектність і вимагає використання вірусів-помічників. [C.379]
Очевидно, вірусні конструкції мають унікальні властивості в плані моделювання деяких варіантів генної терапії. Однак класичні вірусні вектори не можуть бути прямо використані для перспективних завдань генної терапії (крім, можливо, деяких випадків терапії лімфо- проліферативних захворювань) зважаючи на потенційний трансформує дії власних транс-діючих факторів. приводить до порушення основних вимог щодо безпеки лікування. Безумовно перспективним напрямком в цій галузі є розробка нових і тестування наявних векторних систем, транс-дійства-ють чинники яких в значній мірі втрачають трансформує здатність (онкогенний потенціал). Однак навіть і в цьому випадку в даний момент важко адекватно оцінити їх вплив на живий організм. [C.225]
Недолік живий рекомбінантної вірусної вакцини полягає в тому, що при вакцинації осіб із порушеною імунною системою (наприклад, хворих на СНІД) у них може розвинутися Т5гжелая вірусна інфекція. Щоб вирішити цю проблему, можна вбудувати в вірусний вектор ген, що кодує людський інтерлейкін-2, який стимулює Т-клітинну відповідь і обмежує проліферацію вірусу. [C.241]
РСлон кДНК З вбудованим геном може володіти інфекційно-ністю і, як наслідок, їм заражають хазяйське рослина. Якщо ж кДНК з вбудованим геном не володіє инфекционностью, то вірусний вектор може бути транскрибувати з утворенням РНК, яка потім використовується для зараження рослини. [C.514]
Описаний в гл. 19 метод клонування чужорідних последовате ьность в бактеріофагів або плазмидах може бути використаний і для вбудовування генів в еукаріотичні віруси. Шляхом внесення необхідних розривів рестріктазамі і подальшого об'єднання отриманих фрагментів глобінових, інсуліновий і інші гени з багатьох джерел були вбудовані в еукаріотичні вірусні вектори. Один з найбільш поширених векторів-мавпячий вірус 8У-40, який може розмножуватися в клітинах ряду ссавців. Нові гени можуть бути вбудовані в область ранніх або пізніх генів транскрипционной одиниці вірусу. Їх експресія включає стадію утворення РНК-предше-ственник, на 5-кінців якого зазвичай є вірусні послідовності. за якими слід послідовність вбудованого гена. Такі РНК піддаються нормальному сплайсингу, як показано на рис. 26.8. [C.325]
Використання з цією метою векторів ВРУ-типу зручно в тому відношенні, що досить швидко встановлюється безліч копій вірусу (до декількох сотень на клітку). Цим пояснюється успішне застосування вектора на основі ВРУ для високоефективної експресії багатьох білків [1]. Недоліки вірусних векторів пов'язані з обмеженим набором клітинних ліній. в яких можлива реплікація вектора. а рівень експресії і підтримку епісомного стану конструкції в цілому залежать крім усього іншого і від конкретних послідовностей ДНК, клонованих в векторі. Альтернативний спосіб збільшення числа копій, описаний в цьому розділі, передбачає селекцію клітин на ампліфікацію послідовностей вектора після його інтеграції в ДНК клітини-господаря такий підхід не має принципових обмежень на використання того чи іншого типу клітин. При цьому підході можна вибрати клітини з будь-якими потрібними властивостями, наприклад здатністю певним чином модифікувати білковий продукт або дізнаватися конкретну регуляторну послідовність ДНК. [C.239]
Інфікування предімплантірованних ембріонів рекомбінантними ретровирусами - відносно нескладна процедура, яка не потребує дорогого обладнання. Проте будь-яке ген необхідно спочатку переклоніровать в вірусний вектор і цю рекомбинантную конструкцію ввести у відповідні клітини, щоб отримати клітинну лінію. продукує інфекційні рекомбінантні вірусні частинки. Тут, однак, слід мати на увазі, що розмір вставки. яку здатний акцептувати вірусний вектор. обмежений (близько 10 т. п. н.) крім того, що цікавить ДНК може містити [c.309]
Вектори з заміщенням пізніх генів 8 40ДНК. Перші спроби конструювання вірусних векторів були здійснені з вірусом SV40, в ДНК якого немає протяжних спейсеров. У вірусному геномі заміняли на чужДНК пізні або ранні гени. Отримані конструкції були векторами заміщення з ємністю не більше 2,5 т.п.н. причому для роботи з ними був потрібний вірус-помічник. [C.398]
Ще одним підходом, що дає надію на збільшення ефективності переносу генів. є використання в якості векторів ретровірусів. Основна перевага цих векторів полягає в тому, що вони здатні ефективно інфікувати велику кількість різних клітинних типів. Загальний вигляд вірусного вектора. використовуваного для трансгенозу, зображений на рис. 66. ретровірусних вектори забезпечують інтеграцію одиничної копії трансгена в ембріони на різних стадіях розвитку. Перші експерименти. продемонстрували впровадження та успадкування у мишей екзогенно введеного мишачого вірусу лейкемії Молоні (MoMLTV), були проведені ще в середині 70-х років минулого століття Енішем з співробітниками [c.191]
Дані експерименти наштовхнули дослідників на думку про використання певних сегментів вірусного генома в якості ам-пліфіцірующіх вірусних векторів. Перш за все була вивчена можливість введення в дефектний геном вірусу чужорідної ДНК. Р Спет і Н. Френкель (1982 г.) вбудували по Bgal-ділянці плазміди рКС7 (похідна [c.388]
Для експресії клонованих генів в клітинах тварин були сконструйовані два типи векторів в основі одного з них лежить геном SV40, а іншого-геном патгілломавіруса великої рогатої худоби (BPV). Основні властивості цих двох систем вірусних векторів описані в розд. 5.7. Вектори на основі папилломавирусов особливо корисні для синтезу больще кількостей білка, а вектори на основі SV40 використовуються в багатьох експериментах. [C.360]