Видалення білків з розчину
Так як розчинність білків залежить від заряду і наявності гідратної оболонки. то зникнення одного або обох цих факторів веде до осадження білка і втрати його функцій. Деякі способи осадження дозволяють згодом відновити нативні властивості і працездатність білків.
Оборотність осадження білків обумовлена збереженням первинної структури білка. Відновлення фізико-хімічних і біологічних властивостей білка називається ренатівація (ренатурації). Іноді для ренатіваціі досить просто видалити ушкоджує агент.
Денатурація - необоротне осадження білка через розрив зв'язків, що стабілізують четвертичную, третинну, вторинну структури білка, що супроводжується зміною розчинності, в'язкості, хімічної активності, зниженням або повною втратою біологічної функції.
Викликається підвищенням температури, ультрафіолетових і мікрохвильовим випромінюванням, механічними впливами, іонізацією зарядженими частинками.
Залежить від природи денатурирующего реагенту:
- кислоти і луги утворюють водневі зв'язки з пептидними групами,
- органічні розчинники утворюють водневі зв'язки і викликають дегідратацію,
- алкалоїди утворюють зв'язку з полярними групами і розривають систему водневих і іонних зв'язків,
- важкі метали взаємодіють із зарядженими радикалами, нейтралізують негативні заряди і розривають систему водневих і іонних зв'язків.
Висолювання - це додавання до розчину білка нейтральних солей (Na2 SO4. (NH4) 2 SO4). Механізм висолювання полягає у взаємодії аніонів (SO4 2-) і катіонів (Na +. NH4 +) з зарядами білка (групи NH4 + і COO -). В результаті заряд зникає, і відповідно, зникає взаімоотталківанія молекул. Одночасно різко зменшується гидратная оболонка. Все це призводить до "злипання" молекул і осадження.
Так як білки плазми крові відрізняються за розмірами, заряду, будовою, то можна підібрати такі кількості солі, які викличуть осадження менш стійких білків, поки інші ще будуть розчинені.
Наприклад, подібним чином раніше визначали співвідношення альбумін / глобуліни в плазмі крові. Альбуміни, як більш полярні молекули, залишаються в розчиненому стані при 50% насиченні розчину нейтральними солями, в той час як глобуліни в цих умовах вже осідають. У нормі співвідношення альбумін / глобуліни в плазмі крові одно 1,2-1,8.