Виявлення та характеристика ВЛІ неможлива без виявлення і характеристики мікробних асоціацій в лікарнях і контролю за ВЛІ. Для цього необхідно отримувати інформацію з різних джерел.
Діагностика госпітальних інфекцій проводиться за звичайними методиками. які застосовуються в бактеріологічних лабораторіях. Спеціальні методики для внутрішньолікарняних інфекцій не розроблені. Однак при мікробіологічних дослідженнях для виділення збудників госпітальних інфекцій є деякі особливості.
Необхідно встановити етіологічний фактор за багатьма ознаками. рід, тип, підтип. - биоценотический принцип.
Необхідно мати дані по чутливості виділених мікробів до антибіотиків, антисептиків, дезінфектантів, для організації правильного лікування і профілактики. - Хіміотерапевтичний принцип.
Завжди слід враховувати ступінь обсіменіння обстежуваного матеріалу так як при масивному обсеменении ймовірність захворювання збільшується Кількісний принцип.
Треба дотримуватися, так званий, популяційний принцип. Це означає що треба знімати з щільних поживних середовищ кілька колоній, бо дві колонії одного і того ж виду можуть відрізнятися один від одного.
Хворі повинні обстежитися протягом перебування в стаціонарі кілька разів. тому можлива зміна збудника. - Динамічний принцип.
Обов'язково вивчаються фактори патогенності: вироблення токсину, чинників що перешкоджають фагоцитозу і лізису мікроорганізмів, гемоліз вироблення лецитинази у стафілококів і т.д.
Необхідно типування виділених мікробів (фаготіпірованіе, серотіпірованіе і т.д.) - епідеміологічний прінііп.
Епідеміологічний стандарт внутрішньо лікарняного штаму (ековара) може бути рекомендований до використання в рамках мікробіологічного моніторингу в системі епідеміологічного нагляду за ВЛІ, що дозволить поліпшити передепідемічний діагностику ГСИ в ЛПУ з метою прийняття своєчасних адекватних управлінських рішень щодо зниження захворюваності ГСИ.
Методи лабораторної діагностики:
- забарвлення по Граму: стафілококи, стрептококи, ентеробактерії, менинго-, гонококи і ін.
- Ціль-Нельсена: мікобактерії туберкульозу;
- Нейсера, метиленової синькою: дифтерія;
- Романовським-Гімзою: малярія, лейшманіоз, тріпоносомоз, поворотний тиф;
- За Бурі: капсули - пневмокок
- Темне поле: лептоспіра;
- сріблення по Морозову: тільця Пашена (вірус натуральної віспи)
- іммунолюмінісцентний: грип (відбитки зі слизової носа)
Б) Бактеріологічний - посів на рідкі (МПБ) і щільні (ЖСА, МПАкр. Ендо, Плоскірєва, Левіна, Сабуро та ін.) Живильні середовища. Ідентифікація мікроорганізмів, визначення ферментативної і біохімічної активності збудників, постановка строкатих рядів і тестів.
B) Біологічний - досліди з лабораторними тваринами.
2. Серологічний. РА, РСК, РДА, РИГА, РГГА, ІФА, РІА, ПЛР, Пауля- Буннеля і ін.
В основі всіх серологічних реакцій лежить взаємодія антигену та антитіла.
Взяття крові виробляють натщесерце (у запобіганні каламутності (Хілезний) сироватки крові) з ліктьової вени або уколом з пальця, у грудних дітей - з невеликого розрізу п'яти. При взятті крові необхідно дотримуватись правил асептики. Посуд має бути чистою і сухою, стерилізація необов'язкова.
Кров беруть в кількості 5-6 мл. потім ставлять у термостат на 0,5-1 ч. Потім відокремлюють згусток від стінок пробірки і залишають на 18-20 годин в прохолодному місці. Відстояну сироватку зливають в іншу пробірку (при попаданні в пробірку домішки еритроцитів її центрифугують). Сироватка може залишатися на згустку крові не більше 48 годин. Чисту сироватку можна зберігати при температурі 4 ° С-10 ° С не більше місяця. При необхідності більш тривалого зберігання сироватку слід заморозити при температурі -20 ° С - - 70 ° С, зберігати, уникаючи відтавання.
Якщо вдалося взяти мінімальну кількість крові (наприклад, у маленьких дітей) її набирають у кількості 0,1 або 0,2 мл і вносять в пробірку з 0,9 мл або 1,8 мл стерильного фізіологічного розчину (що містить 0,25% лімоннокіслого натрію ), що відповідає розведенню сироватки 1:10. Потім суспензію центрифугують і залишають в холодному місці до ранку. З відстояної сироватки роблять наступні 2-х кратні розведення (1:20; 1: 40 і т.д.).
Другим основним компонентом серологічних реакцій є антиген. Для виявлення антитіл в крові ставлять реакцію з свідомо відомими антигенами. Як антигенів застосовують суспензії живих або убитих мікробів (РА), екстракти або ізольовані хімічні фракції мікробів (РДА, РСК преципитации і ін.).
3. Вірусологічний: матеріалом для вірусологічних досліджень служить: кал, змиви зіва, носа, сироватка крові та ін. Зберігати необхідно при низьких температурах або в замороженому вигляді (виняток: цільна кров - гемоліз еритроцитів). Вірус є облігатним паразитом, тому його культивування представляє певні складності. Для культивування вірусів необхідні культури клітин. Виходячи з цього, підтвердження діагнозу при вірусних дослідженнях частіше грунтується на іммунолюмінісцентном методі (світіння в люмінісцентні мікроскопі комплексу антиген-антитіло), серологічних методах (ПЛР, РФА, метод парних сироваток та ін.), На жаль, більшість цих методів мають лише ретроспективне значення .
4. Останнім часом досить широко стали використовуватися більш інформативні молекулярно-біологічні методи - ПЛР (полімеразна ланцюгова реакція).
Структура відповіді: Основні принципи лабораторної діагностики ВЛІ. Методи лабораторної діагностики.