В даний час проблема цитогенетичної ПД на будь-якому терміні вагітності практично вирішена. Розроблено надійні і
Таблиця 9.7. Характеристика методів отримання препаратів хромосом для стандартного кариотипирования плода Метод Переваги Недоліки результативність
ність Культивування клітин амніотичної рідини і клітин хоріона або плаценти - Висока якість хро-мосомних препаратів:
достатню кількість метафазних пластинок
можливість диф-ференціального фарбування хромосом різними методами Контамінація культур материнськими клітинами
Тривалість куль-тівірованія (1,5-3 тижні)
Небезпека інфікування культури Дорогі реактиви, обладнання та витратні матеріали Вага зразка хоріона не менше 15 мг 99%
(
Сверхчісленная маркерная хромосома
Каріотипування батьків УЗД 2-го рівня Кордоцентез
Сімейна форма?
Ідентифікація точок розриву
Структурна перебудова незбалансований каріотип
Е Почо Збалансований каріотип? нормальний фенотип
ґ ^ \
[) Е поуо,
Збалансований каріотип? аномалії розвитку
аналізу, передбачає ряд діагностичних заходів (рис. 9.5). При виявленні структурної перебудови (або підозрі на її наявність) необхідно уточнити її походження, т. Е. Провести каріотіпіро- вання батьків. У будь-якому випадку необхідно визначити збалансованість аберації, для чого зробити спроби уточнення точок розривів методом Р18Н з використанням локус-специфічних ДНК-зондів. При встановленні батьківської приналежності збалансованої хромосомної аберації рекомендується пролонгування вагітності з УЗ-контролем в динаміці. Якщо встановлений факт виникнення морфологічно збалансованої аберації yoе поVо, необхідно проінформувати вагітну про високий ризик відхилень у розвитку плоду, а також про можливі психічних і фізичних порушеннях у дитини після народження. Рекомендації з ведення вагітності в цьому випадку доцільно виробляти на пренатальному консиліумі з залученням неонатологів і педіатрів. У разі незбалансованого кариотипа, обумовленого перебудовою йе п0V0 або успадкованого від батьків внаслідок сегрегації перебудованих хромосом, рекомендується переривання вагітності. Слід підкреслити, що кариотипирование батьків при виявленні будь-хромосомної перебудови у плода є обов'язковим, т. К. Має принципове значення не тільки для діагностики при цієї вагітності, але і для прогнозу здоров'я майбутніх дітей. Найчастіше носії структурних перебудов виявляються саме в таких ситуаціях.
Носії хромосомних мутацій (реципрокних і робертсонівські транслокаций, ізохромосом, маркерних хромосом) відносяться також до групи підвищеного ризику по ОРД у плода. Наявність хромосомних перебудов приводить до утворення гамет з частковою або повною анеуплоїдій, при подальшій корекції якої виникає ОРД по хромосомах або сегментам хромосом, залучених в перебудову. У цих групах, а р ^^ про ^^ мають ризик ОРД у плода, доцільно заздалегідь передбачити отримання пуповинної крові одночасно для цитогенетичної та молекулярної діагностики, щоб уникнути повторних інвазивних маніпуляцій.
Особливої уваги заслуговують робертсонівські транслокации за участю хромосом 14 і 15. Ризик ОРД становить 0,65%, якщо аберрантним хромосома утворена негомологічної хромосоми, і 66% - якщо вона представлена транслокацией між гомологами або ізохромосома [868]. У випадках виявлення при пренатальному каріотипування таких структурних перебудов, успадкованих або виникли yoе поVо, рекомендується тестування ОРД.
маркерні хромосоми
Маркерними хромосомами зазвичай позначають сверхчісленние хромосоми невідомого походження. Деякі з них є результатом внутріхромосомних, інші - міжхромосомні пере-будівництв. Умовно маркерні хромосоми можна поділити на кілька груп:
за походженням (що виникли yoе поVо і успадковані);
за формою геномної мутації (мозаїчні і немозаічние);
по морфології (спутнічной, т. е. містять короткі плечі акроцентріческіх хромосом, і несателлітние).
Маркерні хромосоми в пренатальному періоді виявляються з частотою 0,6-0,96. 1000 [482]. Залежно від генетичного матеріалу, що входить до складу маркерной хромосоми, вони можуть супроводжуватися вадами або затримкою розвитку плода, мати серйозні клінічні прояви відразу після народження, торкатися лише репродуктивну або ментальну функції, або фенотипически ніяк не проявлятися. Визначення природи маркерних хромосом завжди представляє значні труднощі, проте їх ідентифікація при пренатальному каріотипування, навіть якщо вони належать до сімейних форм, має принципове значення для тактики подальшого ведення вагітності.
При виявленні маркерной хромосоми у плоду необхідно ка ріотіпіровать батьків для встановлення походження маркера (сімейна форма або мутація yoе поVо), провести ідентифікацію маркера всіма доступними методами і визначити форму анеуплоїдії (повна або мозаїчна).
Прогноз більш сприятливий, якщо один з фенотипически нормальних батьків (а також його родичі з нормальними репродуктивною функцією і інтелектом) є носієм ідентичної маркерні хромосоми, представленої в тій же формі (мозаїчної або повної).
Стандартний алгоритм ідентифікації маркерной хромосоми включає різні методичні прийоми (рис.
9.6). На першому етапі
Сверхчісленная маркерная хромосома
'Л ^^^ ДТ З ШЛ \
Т
гЕИА
П5Н з ДНК-зондами, специфічними до центромерного районам всіх хромосом набору
сеп
таг >>>
Ріс.10.18. Метафазні хромосоми 11 з цитотрофобласту хор-іона і ембріональних клітин (аутопсійного матеріал від медичного абортусів, вагітність 8/9 тижнів) після нік-трансляції т $ Ні з передобробці Нра II. гомологи хромосоми
з метафазних пластинок відповідних тканин розташовані по вертикалі. Реєстрація зображень кожної з хромосом в послідовності зліва направо
НТС + р 'ШТС, РІ, ПАРТ Наявність нік-трансляційного сигналу в районі 11р15 відзначено знаком «+», відсутність сигналу - знаком «-»
і: і »
2 3 4 2 3 4
ембріональні клітини
15) 1 * 1
2 3 4 2 3 4
2 | Р1 + Р1ТС З-РГГС 4-Р1
| -0
Ріс.10.24. Комплексна характеристика цитохімічної неоднорідності аутосом людини. Зліва - ідіограмма М-сегментації при рівні дозволу 400 сегментів на гаплоїдний геном [145]. Три відтінки зеленого, білий і чорний відображають ступінь про- чення 5-метілцітозіном, оцінену по 5-бальній системі. Червоним відзначені К-сегменти, зіставні з О-сегментами за змістом 5-метілцітозінаВ центрі
схема розподілу важкого (Н3) і легкого (И) изохор (рівень дозволу 850 сегментів) [772]. Праворуч - ідіограмма К-сегментації (рівень дозволу 400 сегментів) [473]. Ступінь обогащенности ОС-парами підстав іА1і-повторами отмеченаразліч- ної штрихуванням. Пояснення в тексті
ч е ** * *
ч р ***
"^ * '?
* ->;. '** •.; V- »% 1
а 1/1 «/,
04 "
а)
б)
|> Ч I; *
і. 16 '1 * ЧГ_. 16
ТЛ / *
,* Л ",
Про * '.
"Ь X
з
Ріс.10.35. Розподіл флуоресцентного сигналу в метафазних хромосомах з клітки цитотрофобласту (46, ХХ) після імпульсного введення БДУ в другій половині 5-періоду: (а) імунофлуоресцентний детекция БДУ (Р1ТС); (Б) фарбування флуорохромом ОЛР1 V 1. 2
1. у '* Г; -: -
'Ч ^ 16 7:
^. | «* V ч
V4 * ^ * г \ "16 '* |' (• • -; 'V' *". •. - '1Л,
'* -г. "-Г Ч» 1 #.
'> Л \ 1. 99 1 9 9 1.> а)
Ріс.10.36. Особливості реплікації хроматину в ранній 5-фазі клітинного циклу. Імунофлуоресцентний детекция АТ-БДУ на метафазних хромосомах з клітки цитотрофобласту (а, зліва) і білка РСИЛ (ядерний антиген пролі- фелірующіх клітин) на інтерфазних ядрі з клітки лимфоцита людини (б, [381])
Ріс.10.37. Особливості реплікації хроматину в другій половині 5-фази клітинного циклу. Імунофлуоресцентний детекция АТ- БДУ на метафазних хромосомах з клітки цитотрофобласту людини (а, зліва) і білка РСИА (ядерний антиген проліферують клітин) на інтерфазних ядрі з клітки лимфоцита людини (б, [381])
Ріс.10.38. Відмінності в розподілі флуоресцентного сигналу в метафазних хромосомах з клітин цитотрофобласту (а) і ембріональних клітин (б) після імпульсного введення БДУ в другій половині 5-періоду. імунофлуоресцентний детекция
БДУ (МТС)