Час, що потрібне для подвоєння загального числа клітин в такій культурі, не дорівнює часу клітинного циклу або часу генерації. У зв'язку з цим представляється важливим, щоб при дослідженні клітинного циклу проводилося відмінність між Тт, і 7 і величина пролиферативного пулу підтримувалася як можна більш високою. [C.132]
Максимальний проліферативний пул при регенерації дорівнює 69,3%. Ця величина близька до величини пул [c.71]
Значні сортові відмінності ярої пшениці по життєздатності проростків після перенесення ними глибокої посухи встановлені в роботі [577]. Зниження оводненности меристематичних тканин більшості сортів, що вивчалися до 8-10% при довжині паростка 0,7 см ще не викликало загибель рослин, подальше ж зневоднення тканин зменшувало кількість тих, що вижили рослин, причому не однаковою мірою у різних сортів при доведенні вологості меристематичних тканин до 3 % і нижче відновлення їх життєздатності вже не відбувалося, наступала повна загибель. Зниження оводненности меристематичних тканин до порогових значень зменшувало величину пролиферативного пулу на 10-20% При втраті вологи проростками до 30-35% від початкового рівня мітози припинялися, але мітотична активність клітин в стеблових меристемах різних сортів була неоднаковою (табл. 34). Розробка цих питань важлива для ранньої діагностики виживання рослин після водного стресу. [C.198]
Низький проліферативний пул - явище звичайне in vivo (навіть у деяких пухлин проліферативний пул може бути нижче 0,1), але і in vitro в первинних культурах клітин або в культурах, що ростуть в субоптимальних умовах, часто де лятся не всі клітини. Зниження проліферативного пулу може відбуватися внаслідок 1) незворотною диференціювання, 2) вступуклітин в фазу ГО або в стан А, 3) загибелі клітин. [C.132]
Під час просування клітин по циклу від одного мітозу до іншого зустрічається найважливіша критична фаза в періоді О. в якій здійснюється вибір клітиною подальшої долі - йти до поділу або до диференціювання. Вона знаходиться в середині або в завершальній частині періоду 61. У цілому в міру клітинної диференціювання в межах сформованих органів протягом ембріогенезу і в ході постнатального онтогенезу темп репродукції клітин поступово зменшується. При цьому тривалість кожної наступної генерації клітин, як правило, зростає (наприклад, в ході диференціювання клітин мієлоїдного ряду -з 25 до 604 ч), а проліферативний пул і матрична активність ДНК знижуються. Разом з тим в будь-якій стадії розвитку існують променгуточние, бластні елементи з інтенсивною проліферацією і коротким циклом нейробласти, міобласти, еритробласти і ін. Між віком тварини та середньою тривалістю циклу існує певна залежність. Так, проліферативний пул, розрахований для зачатка печінки, склав 64,1%. З віком ця величина зменшується, складаючи у новонароджених щурів близько 39%, через 21 діб від народження -15, через 51 діб -близько 3%. [C.71]
Свежевиделенние культури звуться первинних культур до початку пассірованія або субкультівірованія. Клітини первинної культури зазвичай гетерогенні і характеризуються малим проліферативним пулом, але в них найбільш повно представлені типи клітин тієї тканини, звідки вони були отримані, а також чітко виявляється експресія ряду властивостей. властивих даної тканини. Субкультівірованія забезпечує можливість продовження існування культури (в результаті субкультівірованія виходять лінії клітин), можливість клонування (див. Гл. 4 і 8), дослідження і збереження клітин (гл. 4), а також отримання більш однорідних популяцій. При цьому в багатьох випадках субкультівірованія призводить до втрати спеціалізованих клітин і дифференцировочного ознак, якщо не вживаються заходи для відбору спеціалізованих ліній, і збереження або реіндукціі дифференцировочного властивостей (див. Нижче). [C.16]
Вивчення включення Н -тімідіна в фібробласти в культурах кісткового мозку відповідає цьому припущенню. У 7-денних культурах індекс імпульсної мітки становить 18% і насичення настає за 32 години, коли індекс мітки досягає 90%. У 12-денних культурах при такому ж індексі імпульсної мітки насичення відбувається між 48 і 72 годинами при індексі мітки, рівному 78% (І. В. Кейліс-Борок та ін. 1971). Звідси випливає, що проліферативний пул в колоніях фібробластів в 7-денних культурах надзвичайно високий, а до 12-го дня культивування він дещо зменшується. Можливо, це пов'язано з тим, що частина клітин в таких колоніях піддається диференціювання і в зв'язку з цим перестає ділитися. Сред- [c.26]
Клітини-попередники для колоній фібробластів. що виникають в культурах, знаходяться в початковому кістковому мозку поза проліферативного пулу. Вони поступово входять в S-період через 28 годин після експлантаціі. Дійсно, при введенні в культури кісткового мозку Н -тіміді -на на перші 4-72 години з подальшим культивуванням на середовищі з холодним тимідин виявилося, що індекс мітки фібробластів, що з'являються в 3-5-денних культурах, залежить від тривалості того початкового періоду, протягом якого культури велися на середовищі з Н -тим-Діном (І. В. Кейліс-Борок та ін. 1971). Якщо Н -тімідін присутній в середовищі не довше перших 28 годин, фібробласти залишалися немічених, хоча значна частина гистиоцитов в таких культурах містила мітку. Якщо Н -тімідін знаходився в середовищі протягом перших 31 годин і довше, то індекс мітки фібробластів був 30% і вище. При цьому підвищення індексу мітки відповідало подовженню терміну контакту культур з Н -тімідіном. Максимум мітки (98%) досягається при культивуванні в присутності Н -тімідіна протягом 60 годин. Ці дані показують, що включення мітки в клітини-попередники для фібробластів не відбувається в перші 28 годин культивування та що клітини-попередники вступають в проліферативний пул поступово після 28 годин. Важливою умовою для вступу клітин-попередників в стан проліферації виявилося їх прикріплення до поверхні субстрату. При інкубації зважених в середовищі клітин кісткового мозку в присутності Н -тімідіна протягом навіть 2 доби фібробласти мітку практично не містили (І. В. Кейліс-Борок та ін. I97I). Зазначене властивість істотно відрізняє клітини -предшественнікі для фібробластів від клітин-попередників для гистиоцитов. Їх проліферація починається з моменту експлантаціі, а максимум проліферативної активності в експлантати кісткового мозку доводиться на першу добу культивування. [C.29]
Слід зазначити, що метаміелодіти входять в проліферативний пул. Про це свідчить той факт, що за першу годину культивування в присутності Н -тімідіна значна частина метамиелоцитов (307о) виявляється ме ченой. Однак все мітози, виявлені в відбитках цього терміну, мітку не містили. Здатність метамиелоцитов до проліферації була виявлена нами і в більш длитель них культурах. [C.43]
Таким чином. і в першому і в другому випадку стовбурові кровотворні клітини в культурах зберігаються недовго - протягом декількох діб. В якому стані вони знаходяться Б експериментах з введенням в живильне середовище зростаючих доз Н -тнмндіна, що викликають загибель клітин, що знаходяться в S-періоді, вдалося показати, що велика частина стовбурових кровотворних клітин 2-денних культур, що ростуть на фідері, знаходиться в стані активної проліферації, в той час як стовбурові клітини культур з кондиционированной середовищем поза проліферативного пулу число їх під дією Н -тімідіна практично не змінювалося (M ullo h, Till, 1971). Ці чіткі спостереження свідчать про те, що умови культивування істотно впливають на стан стовбурових кровотворних клітин. Не виключено, що в даному випадку умови культивування сприяють збереженню тієї чи іншої частини популяції стовбурових клітин (пролиферирующей і яка покоїться). [C.68]
Введення Н -тіміДіна в 7 і 11-денні культури кл потік крові дозволило визначити проліферативний п) (рис. 26) і час генерації фібробластів в колоніях. цього використовувалися криві насичення з урахуванням, що ре йде про логарифмически зростаючої клітинної популяції. І деці мітки фібробластів за 15 хвилин, від якої потерпають відсоток клітин, що знаходяться в 5-періоді, виявилася рівною 18%. Проліферативний пул для 7- і 11-денних культ виявився не менш 84 і 79%. З наведених даних слід [c.89]
У вихідної популяції клітини-попередники для фібробластів виходять за межі пролиферативного пулу. Вони входять в нього лише через 28 годин і більше після експлантаціі. Ці клітини-попередники високорадіочувстві-тельно, але в процесі культивування їх нащадки набувають стійкості до опромінення, можливо в зв'язку з переходом з одного морфологічного стану в інше. [C.149]
Субпопуляція ГМК судинної зони забезпечує основний проліферативний пул міометрія. Інтенсивно пролиферирующие перицитам новоутворених судин є джерелом формування сполучнотканинних клітин і, ймовірно, лейомиоцитов міометрія. [C.125]
Методи культури клітин для біохіміків (1983) - [c.132]