Залишковий азот. Визначення залишкового азоту
Залишковим азотом називається азот, наявний в складових частинах кровігосвобожденной від білка. Це, наприклад, азот аміаку, амінокислот, сечовини, сечової кислоти, креатину-креатиніну. Цей небілковий азот крові знаходиться в фільтраті, в якому білки крові обложені.
Необхідні реактиви. 1) 10% розчин вольфрамовокіслого натрію; 2) 2/3 н. розчин сірчаної кислоти; 3) 1% розчин сірчаної кислоти; 4) пергідролем; 5) стандартний розчин аміаку. 235,7 мг хімічно чистого висушеного при 100 ° сірчанокислого амонію розчиняють в 1 л дистильованої води, 1 мл цього розчину містить 0,05 мг азоту; 6) реактив Несслера: йодистой ртуті 10 г + 5 г йодистого калію + 20 г їдкого калію + 200 мл дистильованої води; 5 г йодистого калію розчиняють в 30 мл дистильованої води, переливають в чисту фарфорову ступку, туди всипають 10 г йодистой ртуті, ретельно розтирають, залишають на деякий час до максимального розчинення; 20 г їдкого калію розчиняють в 60 мл дистильованої води і, коли цей розчин охолоне, його змішують з першим розчином, доливають дистильованою водою до об'єму 200 мл і залишають на 2-3 дня.
Коли випаде осад надлишку солей ртуті, розчин фільтрують через скляну вату і зберігають в темній пляшці з притертою пробкою.
Методика визначення. Після уколу голкою Франка в палець беруть мікропіпеткою 0,2 мл крові і видувають її в центрифужную пробірку з міткою на 10 мл, що має 5,4 мл дистильованої води; цією ж водою кілька разів промивають микропипетку від залишків крові, доливають 0,2 мл реактиву № 1, добре змішують і, весь час помішуючи, додають по краплях 0,2 мл реактиву № 2.
Пробірку прикривають корком, суміш енергійно збовтують і залишають на 1-2 години для осадження білків, після чого розчин фільтрують у чисту суху пробірку через маленьку лійку. Виходить прозорий фільтрат. У чисту суху пробірку піпеткою вливають 3 мл отриманого фільтрату (що дорівнює 0,1 мл крові), додають 1 мл реактиву № 3 і поміщають на пісочну баню для нагрівання до появи густих білих парів. Після цього пробірку знімають, охолоджують, додають 1-2 краплі реактиву № 4 і знову нагрівають на піщаній бані до утворення в пробірці безбарвною і прозорою рідини.
Прозору рідину в пробірці охолоджують і додають до неї 6 мл дистильованої води. Одночасно готують стандартний розчин. У таку ж пробірку з міткою на 10 мл вливають 1 мл реактиву № 5 (стандартний розчин), 1 мл реактиву № 3, 6 мл дистильованої води і добре змішують. В обидві пробірки наливають по 3 мл реактиву № 6, доливання ють дистильованої води до мітки 10 мл і колоріметрйруют
Розрахунок. При колориметруванні для реакції вжито 0,1 мл крові. Стандарт (0,05 мг залишкового азоту) встановлено на 20. Досліджуваний розчин при однаковій забарвленням зі стандартом встановлено, припустимо, на 27. Ці дані отримані при кількості 0,1 мл випробуваної крові. Кількість залишкового азоту в 100 мл даної крові буде в стільки разів більше, у скільки більше 0,1.
З огляду на те, що деяка кількість залишкового азоту може бути в реактивах, а також і в дистильованої воді, то необхідно визначити залишковий азот в вживаних при реакції реактивах і воді, отриманий результат відняти від результату дослідження крові.
Концентрація залишкового азоту в нормі в крові становить 20-40 мг%. При хвороби нирок кількість RN підвищується і може досягати 200 мг%.